本文标题:细菌、植物细胞和哺乳动物细胞-生物学技术分析
信息分类:站内新闻 新闻来源：未知 发布时间：2017-10-24 0:59:21
细菌、植物细胞和哺乳动物细胞-生物学技术分析
应用分子生物学技术分析复杂的基因组，首先必须制备纯的高
分子量DNA。
从细菌、植物细胞和哺乳动物细胞的基因组DNA的纯化方法开
始，这些方法由两部分组成：先是温和裂解细胞及溶解DNA的技术
，接着采用几种化学和酶学方法中的任一种，以去除杂蛋白、RNA
及其他的大分子。这里所述的基本方法广泛适用于各种起始材料。
本章还简要地汇编了进一步纯化和浓缩核酸的一般方法。
实际上分子生物学的所有方法从某种程度上讲都需要进行核酸
的分级分离。层析技术对于某些应用是合适的，比如分离双链核酸
和单链核酸、分离质粒与基因组DNA以及从细胞裂解物碎片中分离
基因组DNA。然而，凝胶电泳法因比其他方法具有更高的分离度，
因而成为一般情况下首选的分离方法。凝胶电泳分离法既可以是分
析型的，也可以是制备型的。
总的来说，应用凝胶电泳技术分离核酸比分离蛋白质要容易。
核酸是带均匀负电荷的分子,基本不存在影响迁移率的复杂结构。
影响核酸在凝胶上的迁移有多种重要的变量，这些变量包括：核酸
的构象、凝胶孔径的大小、所用的电压梯度以及缓冲液的盐浓度，
其中最基本的是凝胶孔径的大小，它决定了能被分离的片段的大小
。在实际操作中，这意味着较大孔径的琼脂糖凝胶用于分离>500--
10 000 bp的片段，而较小孔径的聚丙烯酰胺凝胶或筛分型琼脂糖
凝胶则用于分离<1 000 bp的片段。
通常需从凝胶电泳分离的复杂的混合物中鉴别出某个特定的片
段，这可以采用Southern杂交技术来完成，即先将所有片段从凝胶
上转移至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，然后用标记的核酸探针进行杂
交，以鉴别出目的片段。本章全面总结了固定已分离的DNA片段的
方法与所需材料及相关的杂交技术。这些方法为对复杂基因组中的
单拷贝或多拷贝序列进行定位作图及鉴别作出了巨大贡献，并且促
进了最初的真核基因克隆实验的完成。
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